GH/T 1316—2020 蜂蜜中松二糖' 松三糖'毗喃葡糖基蔗糖' 异麦芽糖和蜜三糖含量 的测定高效液相色谱法[高清PDF]

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标准部分原文

(*注：以下内容并未完全按照原文进行排版，且信息并不完全，也未经过严格校对，所以仅供参考！建议【不要直接作为从业依据】！具体信息还请阅读标准原文PDF。)

1范围

本文件规定了蜂蜜中松二糖、松三糖、毗喃葡糖基蔗糖、异麦芽糖和蜜三糖含量的高效液相色谱测 定方法。

本文件适用于蜂蜜中松二糖、松三糖、毗喃葡糖基蔗糖、异麦芽糖和蜜三糖含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样用水溶解，乙席定容后，过滤，液相色谱-蒸发光散射法测定，外标法定量。

5试剂和材料

1乙腊：色谱纯。

2水：GB/T6682规定的一级水。

5.3三乙胺：优级纯。

5.4乙腊+水溶液（40： 60, v/v）：准确量取40 mL乙腊（5.1）置于100mL容量瓶中，用水（5.2）定 容，摇匀。

5.5松二糖、松三糖、毗喃葡糖基蔗糖、异麦芽糖和蜜三糖标'准物质：信息见附录A,纯度均＞98%o

5.6标准储备溶液：称取松二糖、松三糖、毗喃葡糖基蔗糖、异麦芽糖和蜜三糖标准物质（5.5）各0.2 g （精确至O.lmg）,分别置于10mL容量瓶中，加入6 mL水溶解，用乙腊定容，摇匀，配置成各标准 物质储备液，浓度为2g/100mL。该储备液储存在4。（2条件下，有效期3个月。

7标准工作溶液：分别吸取松二糖、松三糖、毗喃葡糖基蔗糖、异麦芽糖和蜜三糖标准储备溶液（5.6） 50应、100应、250应、500应、750应至10mL容量瓶中，用乙睛+水溶液（5.4）稀释并定容，混匀， 分别配制成 0.01 g/100mL, 0.02 g/100mL, 0.05 g/100mL, 0.1 g/100mL, 0.15 g/lOOmL 浓度的 5 种糖混 合标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线。该工作溶液现用现配。

6仪器和设备

1高效液相色谱仪：配有蒸发光散射检测器。

2分析天平：感量O.lmg和O.OOlg。

3微量可调移液器：量程100卩L和ImL。

6. 4有机相过滤膜：0.22卩m。

6. 5样品瓶：2mL。

6. 6 容量瓶：10mL, 100mL。

7试样制备与保存

7.1试样的制备

对无结晶的实验样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60。。的水浴 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶 中，密封，并做上标记。

7.2 试样的保存

将试样于常温下保存。

8测定步骤

8. 1样品前处理

用天平（6.2）称取5 g试样（精确至O.OOlg）,置于100mL烧杯中，加入30 mL水，用玻璃棒搅拌 使试样完全溶解，转移至100mL容量瓶（6.6）中，再用10 mL水洗烧杯并转移至上述lOOmL容量瓶 中，重复3次，然后用乙腊定容，混匀。用0.22pm滤膜（6.4）将样液过滤入样品瓶（6.5）中，供高 效液相色谱仪（6.1）测定。

8. 2测定

8.2. 1液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a）色谱柱：Amide 1.7 gin 150 nimx2.1 mm i.d （或相似规格）;

b）流动相：A, 0.1%三乙胺（5.3）-乙腊溶液；B,水。梯度洗脱条件见表1；

c）流速：0.25 mL/min；

d）柱温：60°C；

e）漂移管温度：75°C；

f）气体压力：40 psi；

g）喷雾器模式：加热，动力水平为60%；

h）进样量：3 gLo

表1梯度洗脱条件（A, 0.1%三乙胺-乙腊溶液；B,水）

时间（min）

流速 (mL/min)

A(%)

B(%)

初始

0.25

90

10

3

0.25

90

10

10

0.25

80

20

23

0.25

80

20

26

0.25

65

35

28

0.25

65

35

29

0.25

90

10

35

0.25

90

10

8. 2. 2液相色谱测定

将标准工作液（5.7）按照上述色谱条件上机测定，记录色谱峰峰高或峰面积，以峰面积或峰高为 纵坐标，以标准工作溶液浓度为横坐标，采用幂函数方程绘制标准曲线，或根据色谱工作站自动化计算。 在上述色谱条件下，松二糖、异麦芽糖、毗喃葡糖基蔗糖、松三糖和蜜三糖的参考保留时间为分别为: 13.6 min、17.9 min、21.9 min、22.5 min和25.6 min，其标准工作溶液和代表性样品的色谱图见附录B.1 和 B.2。

8. 3平行试验

按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。

8. 4空白试验

除不称取样品外，均按上述步骤进行。

9结果计算

结果按照色谱工作站自动计算或按式（1）计算：

V

X = C X （1）

m

式中：

『试样中被测组分含量，单位为克每百克（g/100g）;

C一从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为克每百毫升（g/100mL）；

J样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

四一所称试样的质量，单位为克（g）o

注：计算结果应扣除空白值

10定量限

本文件中松二糖、松三糖、毗喃葡糖基蔗糖、异麦芽糖和蜜三糖的定量限均为0.2 g/100go

11精密度

平行试验两次测定的绝对差值不超过其算数平均值的10%。

（以上是摘录部分标准内容，更多信息还请参考原文PDF）

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