农业行业标准 水果中黄酮醇的测定 液相色谱-质谱联用法[高清PDF]

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(*注：以下内容并未完全按照原文进行排版，且信息并不完全，也未经过严格校对，所以仅供参考！建议【不要直接作为从业依据】！具体信息还请阅读标准原文PDF。)

1范围

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4.3标准溶液配制 4. 3. 1黄酮醇标准储备液:分别称取懈皮素、山奈酚、异鼠李素、杨梅素、丁香亭和落叶松亭-标准品20.00 mg, 用甲醇(4. 1. 3)溶解并定容至50 mL,配制成400 mg/L的标准储备液,-20°C保存,可使用12个月。

4. 3. 2黄酮醇混合标准溶液:根据需要，准确吸取一定量的各黄酮醇标准储备液，用甲醇(4. 1. 3)稀释成

适当浓度的混合标准溶液，现用现配。

4.4材料 4. 4. 1有机相微孔滤膜：0. 22 Mmo

4. 4. 2固相萃取小柱:反相C18固相萃取小柱,200 mg/6 mL,或性能相当者。

5仪器

5. 1液相色谱仪:配有三重四级杆质谱检测器。

5.2电子天平:感量为0.01 g和0.000 1 go

5. 3离心机：9 000 r/min以上。

5.4油浴锅:带磁力搅拌，温度可调节。

5.5超声波清洗器。

5.6旋转蒸发仪。

6试样的制备

取可食部分，切碎混匀,制成匀浆。

7分析步骤

7.1提取

称取10.00 g试样于50 mL棕色离心管中，加入约30 mL提取剂(4.1. 6),混匀，室温下超声萃取20 min, 9 000 r/min离心5 min,上清液转入50. 0 mL棕色容量瓶中，残渣再用约10 mL提取剂(4. 1. 6)按上述步 骤重复提取一次，合并2次提取液，用提取剂(4. 1. 6)定容至50. 0 mL。

7.2黄酮醇糖昔的制备

7. 2. 1吸取20. 00 mL样品提取液(7.1)于250 mL旋转蒸发瓶中，40°C下减压蒸发至近干，加入5 mL 水,摇匀。

7. 2. 2依次用5 mL甲醇(4. 1. 3)和约5 mL水预淋洗、活化固相萃取小柱(4. 4. 2)。

7- 2.3将7. 2. 1的溶液倒入活化好的固相萃取小柱(7. 2. 2),缓慢抽滤(滤液呈滴状流出)，弃去滤液。再 用5 mL水分2次清洗旋转瓶，转入固相萃取小柱中，抽滤，弃去滤液。

7- 2.4用10 mL甲醇(4. 1. 3)分2次清洗旋转瓶，转入固相萃取小柱中，收集滤液于250 mL旋转瓶中， 蒸干备用。

7.3黄酮醇的制备及净化

7- 3. 1在收集有提取物(7.2.4)的旋转瓶中加入20.0 mL2%硫酸溶液(4. 1.5),并将其放入到150°C的 油浴锅(5. 4)中，加热回流20 min后取下冷却。

7. 3. 2依次用5 mL甲醇(4. 1. 3)和约5 mL水预淋洗、活化固相萃取小柱(4. 4. 2)。

7. 3.3将7. 3.1的溶液倒入固相萃取小柱中、緩慢抽滤(滤液呈滴状流出)，弃去滤液。用10. 00 mL水 分2次清洗旋转瓶,转入固相萃取小柱中，抽滤，弃去滤液。

7- 3.4用20 mL甲醇(4. 1. 3)分4次清洗旋转瓶，转入固相萃取小柱中，收集并合并滤液于旋转瓶中， 40°C下减压蒸发近干，用甲醇(4. 1.3)定容至4.00 mL,混匀,过滤膜(1. 1.1),待测。

7.4试剂空白试验

除不加入样品外,其他过程与样品处理相同。

7.5测定

7.5.1液相色谱-串联质谱参考条件

色谱柱:反相Ci8色谱柱，柱长150 mm,内径2.1 mm,颗粒度1. 8 〃m,或性能类似色谱柱，并连接相 同填料保护柱。

流速:0. 3 mL/min。

时间，min

流动相A,%

流动相B,%

0. 00

100

0

1. 00

80

20

2. 00

70

30

8. 00

55

48

8. 20

20

80

9. 20

20

80

9. 50

100

0

15. 00

100

0

柱温：40°Co

进样量：2 jiL。

电离源模式：电喷雾离子化。

电离源极性:正离子模式。

雾化气:氮气。

碰撞气(高纯氣气)流速：0. 13 mL/min。

离子源温度：150°Co

脱溶剂气温度：500°Co

脱溶剂气流量：800 L/h。

监测离子对、碰撞气能量和源内破碎电压参见附录B。

7.5.2定性测定

在相同试验条件下进行样品测定时，样品检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，扣除背景后的 样品质谱图中所选离子均出现,而且所选的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致(表2),则可判断 为该成分检出。试剂空白不应有对被测组分有干扰的物质检出。

表2质谱选择离子丰度允许偏差

单位为百分号

相对丰度

>50

>20—50

>10—20

<10

允许偏差

W±20

<±25

<±30

<±50

7.5.3定量测定

标准采用外标-校准曲线法定量测定。保证所测样品中组分的响应值均在仪器的线性范围内。

8结果计算

样品中待测组分的含量以质量分数计,以毫克每千克(mg/kg-表示，结果按式(1)计算。

Y p X V X Vpm XV!

式中：

X——试样中待测组分的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

p——标准曲线计算出试样提取溶液中各组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；

V ——试样提取液定容体积，单位为毫升(mL)；

V。——净化后用于仪器测定的定容体积，单位为毫升(mL);

Vi——吸取用于制备黄酮醇的样品溶液体积，单位为毫升(mL)；

m ——所取试样的量，单位为克(g)。

计算结果保留到小数点后2位。

（以上是摘录部分标准内容，更多信息还请参考原文PDF）

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