NY/T 3141—2017 饲料中2,6-二甲基-3,5-二乙酯基-1,4-二氢毗暁的测定 液相色谱一串联质谱法[高清PDF]

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饲料中2,6-二甲基-3,5-二乙酯基-1,4-二氢毗暁的测定液相色谱一串联质谱法

标准储备溶液:准确称取适量1,4 -二氢毗陇对照品(精确到0.1 mg),用乙睛溶解、定容，配成储备溶液浓度为1 mg/mL,转移至棕色瓶。一20°C冰箱内保存，有效期为 3个月。

9标准中间溶液:准确吸取2,6 -二甲基-3,5--乙酯基- 1,4 -二氢毗嚏储备溶液(4. 8)0. 2 mL,用乙

睛稀释、定容至100 mL,使之浓度为2. 0 ptg/mL,转移至棕色瓶。一20°C冰箱内保存，有效期为1个月。

4. 10 0. 1%甲酸+5 mmol/L乙酸铉水溶液:称取乙酸铉(4. 3)0. 385 g加水定容至1 000 mL,加入甲酸 (4. 4)1 mL,摇匀，即得。

4. 12微孔滤膜：O. 22 Mm,有机相。

13密封盖塑料离心管:50 mLo

5仪器和设备

1高效液相色谱一串联质谱仪(配电喷雾离子源)。

5- 2分析天平:感量为0.1 mg和0.01 g各1台。

5.3离心机:转速为8 000 r/min及以上。

5.4超纯水器。

5.5涡旋混合器。

5. 6振荡器。

5.7固相萃取装置。

6采样和试样制备

按照GB/T 14699. 1的规定抽取有代表性的饲料样品,用四分法缩减取样。按GB/T 20195的规 定制备试样，全部通过0. 28 mtn孔筛，充分混匀，装入密闭容器中，避光低温保存,备用。

7分析步骤

7. 1提取

7. 1. 1配合饲料、浓缩饲料或精料补充料:准确称取2 g(精确到0.01 g),置于250 mL具塞锥形瓶 中，加入95%甲醇(4. 5)50mL。置于振荡器上中速振荡30 min,静置2 min。移取适量上清液于离心 管中，以8 000 r/min离心5 mino准确吸取上清液0. 2 mL,用95%甲醇(4. 5)定容至10 mL,作为备 用液。

7. 1.2添加剂预混合饲料:准确称取1 g(精确到0.01 g),置于250 mL具塞锥形瓶中，加入90%乙睛 (4.6)50 mLo置于振荡器上中速振荡30 min,静置2 min。移取适量上清液于离心管中，以8 000 r/min 离心5 min。准确吸取上清液0. 1 mL,用90%乙睛(4. 6)定容至10 mL,作为备用液。

7.2净化

7.2. 1配合饲料、浓縮饲料或精料补充料:固相萃取柱依次用甲醇3mL、水3 mL活化(活化后萃取柱 内水相液面高于柱筛板1 mm〜2 mm),取备用液(7. 1.1)3. 0 mL过柱,收集流出液至10 mL试管内，涡 旋混匀，过。.22 fzm滤膜。

7. 2. 2添加剂预混合饲料:取适量备用液(7. 1.2),过0. 22滤膜。

7.3标准曲线的制备

根据测定试样种类不同，按7. 1和7. 2步骤分别制备配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预 混合饲料空白试样备用液。精密量取适量2,6 -二甲基-3,5-二乙酯基-1.4-二氢毗嗟标准中间溶液 (4. 9),用上述空白试样备用液稀释定容，制得0. 000 4昭/mL、O. 002 Mg/mL,O. 005 pg/mL、O. 01 Mg/ mL、O. 02 fig/mL、O. 05网mL、O. 1 pig/mL各系列工作溶液,供高效液相色谱一串联质谱测定。

7.4测定

7.4. 1液相色谱参考条件

色谱柱:C|8柱，柱长100 mm,内径2. 1 mm,粒径2. 4 ptm；或性能相当的分析柱；

流动相A为乙睛，流动相B为0. 1%甲酸+5 mmol/L乙酸铉水溶液，梯度洗脱条件见表1;

柱温：30°C；

进样量：10MLo

表1流动相梯度洗脱参考条件

时间,min

流动相A,%

流动相B,%

流速,mL/min

0

20.0

80.0

0. 20

2. 00

80.0

20.0

0. 20

5. 00

80.0

20.0

0. 20

5.01

95.0

5. 00

0. 40

12. 00

95.0

5. 00

0. 40

12.01

20.0

80.0

0. 20

15. 00

20.0

80.0

0. 20

7. 4.2质谱参考条件

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式:正离子扫描；

检测方式:多反应监测；

毛细管电压、碰撞能量等参数应优化至最佳灵敏度；

定性离子对、定量离子对等参数见表2。

表2 2,6 -二甲8-3,5-二乙酯基-1,4 -二氢毗嗟的定性、定量离子对及碰撞能量参考值

名称

定性离子对,m/z

定量离子对,m/ z

碰撞能量,V

2,6-二甲基-3,5 -二乙酯 基-1,4-二氢毗嚏

254/208

254/208

6

254/108

22

7.4.3定性测定

在相同试验条件下，试样中待测物的保留时间与标准工作溶液的保留时间偏差在±2.5%以内，且 试样谱图中各组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子相对离子丰 度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定试样中存在对应的待测物。

表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差

单位为百分率

相对离子丰度

>50

20-50（含）

10-20（含）

<10

允许的最大偏差

±20

±25

±30

±50

7.4.4定量测定

取试样制备液(7. 2. 1或7. 2. 2)和相应浓度的标准工作溶液(7. 3),作单点或多点校准，以色谱峰面 积定量。当待测物浓度超出线性范围时，应适当调整稀释倍数后测定。2,6-二甲基-3,5 -二乙酯基- 1,4 -二氢毗嚏标准工作溶液多反应监测(MRM)色谱图参见附录A。

8结果计算

试样中2,6 -二甲基-3,5 -二乙酯基-1,4 -二氢毗嚏的含量X,以质量分数表示，单位为毫克每千克 (mg/kg)，单点校正按式(1)计算。

X = A； X Cs X Vs X V X 如As XmXVi

式中：

X ——试样中2,6--甲基-3,5 -二乙酯基-1,4 -二氢毗嚏含量，单位为毫克每千克(mg/ kg)； A,——试样溶液峰面积值；

Cs——标准工作溶液浓度，单位为微克每毫升(*g/ mL)；

Vs——标准工作溶液进样体积，单位为微升3L);

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