NY/T 1471—2017 牛毛滴虫病诊断技术[高清PDF]

标准简介

[NY/T 1471—2017]《牛毛滴虫病诊断技术》由2017-06-12于2017-06-12发布,适用于全国。

标准截图

牛毛滴虫病诊断技术
牛毛滴虫病诊断技术(截图)

 

标准文档说明

标准文档类型为牛毛滴虫病诊断技术高清PDF版本(文字版),标准文档内可进行搜索,可以复制原文,可粘贴。

标准部分原文

(*注:以下内容并未完全按照原文进行排版,且信息并不完全,也未经过严格校对,所以仅供参考!建议【不要直接作为从业依据】!具体信息还请阅读标准原文PDF。)

1范围

本标准规定了牛毛滴虫病的病原显微镜检查技术和聚合酶链反应(PCR)扩增虫体DNA的检测 方法。

本标准适用于牛毛滴虫病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法

GB 19489实验室生物安全通用要求

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CTAB: hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基漠化铉。

DNA:deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。

dNTP: deoxynucleoside triphosphate,三磷酸脱氧核昔酸。

PBS:phosphate buffer solution,磷酸盐缓冲液。

PCR: polymerase chain reaction,聚合酶链反应。

Taq 酶:Taq DNA polymerase, Taq DNA 聚合酶。

4生物安全措施

进行牛毛滴虫病实捡室检测时,如显微镜检査、DNA提取等,按照GB 19489的规定执行。

5临床诊断

5. 1临床症状

5. 1. 1公牛

公牛很少或没有临床症状发生。若有症状,主要包括黏液性包皮炎,包皮肿胀,并分泌出大量脓性 物质;包皮黏膜上出现粟粒大的红色结节,有痛感,不愿交配。

5.1.2母牛

母牛出现阴道损伤,卡他性炎症,阴道红肿;黏膜出现粟粒大或更大的小结节,排出黏液性分泌物; 宫颈和子宫内膜出现炎症;随后发生不规则的发情,子宫脱垂、子宫积脓和早期(1周〜16周)流产。

5.2结果判定

根据牛交配、人工授精或母牛的生殖系统检查史,公牛具有5. 1.1临床表现、母牛具有5.1. 2临床 表现时,可判定为疑似牛毛滴虫病。

6实验室诊断

6. 1.1.1 母牛

选择发情后1 d〜2 d的母牛,用水将母牛外生殖器洗涤干净。然后,釆用下列任何一种方法采样: 取市场上出售的常规型号的注射器,如50 mL、100 mL的注射器,将30 mL〜40 mL的30°C〜 35°C灭菌生理盐水急速注入阴道,以洗涤子宫和阴道壁。收集洗涤液于离心管中, 1 500 r/min~2 000 r/min离心5 min后,取沉淀物作为待检样品。

取一长30 cm、直径0. 9 cm,并在离一端9 cm处弯成150°角的消毒玻璃管,注入1 mL〜2 mL 的30°C〜35°C灭菌生理盐水,收为待检样品。

公牛

a)

b)

cm、

,取

4胃

CR检测,可

率的显微镜下,视野放暗,迅

有大量虫体。 不同,发情后

而净,吸取

GB/T

A. 1)

%

容物;发

品。

和新近感染去

期内毛滴

'也

6. 1. 1.2

首先将公牛外生殖器洗Z 后,以手压紧包皮口,使液 2 000 r/ min离心 5 min

6. 1. 1.3 精液

取人工采集2

6. 1.1.4 其他

产仔牛、流产牛 以 1 500 r/ mi 注:不同情i 在感染 3 d~7

6.1.2样品

样品采 置于无菌密F

6.2

滴虫的数量有所不I 的母牛阴道,

〜35P灭菌生理盐水注入包皮腔内。然 集于离心管中,以1 500 r/ min~

内送实验

珂?积脓排出物,

除特别说明以

显微镜、载

(见 A. 2)、CT

聚合酶、1XPCR

研杵、捣碎机、抗有

6.3病原显微镜检查

6. 3. 1压滴标本检查法

将釆集的待检样品1滴

速进行检查。可重复进行2片〜3

6. 3.2染色标本检查法

将釆集的待检样品少量置于载玻片一端,立即推制成均匀的薄膜。在室温下干燥,后用甲醇固定 2 min。将固定的抹片浸入足量的姬姆萨染色稀释液的染色皿中,染色0. 5 h〜1 h,取出水洗,吸干或烘 干后镜检。

6.3.3结果判定

在显微镜下观察,胎儿三毛滴虫的形态特征参见附录B。两种方法只要有一种方法观察到胎儿三 毛滴虫即判为病原镜检阳性,未观察到胎儿三毛滴虫判为病原镜检阴性。

6.4病原PCR检查

6. 4.1 PCR 引物

1水或超纯水。

L pH 7. 2 的 PBS

器、热启动Taq

、匀浆器、研钵和

(以上是摘录部分标准内容,更多信息还请参考原文PDF)

网盘链接

百度网盘:https://pan.baidu.com/s/19JmnKDWBWvKXfipVrUq8Eg
提取码:xb7f

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