NY/T 3791—2020 鸡心包积液综合征诊断技术[高清PDF]

标准简介

[NY/T 3791—2020]《鸡心包积液综合征诊断技术》由中华人民共和国农业农村部于2020-11-12发布,适用于全国。

标准截图

鸡心包积液综合征诊断技术
鸡心包积液综合征诊断技术(截图)

 

标准文档说明

标准文档类型为鸡心包积液综合征诊断技术高清PDF版本(文字版),标准文档内可进行搜索,可以复制原文,可粘贴。

标准部分原文

(*注:以下内容并未完全按照原文进行排版,且信息并不完全,也未经过严格校对,所以仅供参考!建议【不要直接作为从业依据】!具体信息还请阅读标准原文PDF。)

鸡心包积液综合征诊断技术

1范围

本标准规定J'鸡心包积液综合征的临床诊断、病毒分离、琼脂扩散试验、聚合IW链式反应(PCR)、荧光 定量PCR和病毒中和试验的技术要求。

本标准适用于鸡心包积液综合征的诊堀

下列义件对于本文仰 凡是不注H期的引用文

GB/T 6682 分月

GB 19489 实!

NY/T 541

NY/T 1948

下列缩略i

CPE:致纟II

DNAJI兑聞^ FAdV I:

HPS:鸡兀

LMH:鸡月■

PBS:磷酸古

PCR:聚合幫 Real lime PC・

SPF:无特定病

:组织半長

VN:病毒中和试捡

当鶏出现以下2种或2种以I梱

a)临床发病急,突然死亡,死亡率TE

b)剖检心包腔中冇淡黄色清亮的积液;

c)肝脏肿大、坏死、有出血点或出血斑。

样品采集与处理

5. 1样品米集 从病死鸡釆集的组织样品应以肝脏为主。活禽采集泄殖腔拭子。

5.2样品处理

5.2.1组织样品处理

将病死禽的肝脏等组织样M 10 g〜2() g剪碎研磨后,加入5倍体积含有抗生素(青霉素2 ()00 11〃 mL、链霉素2 mg/ml,、庆大霉素50仃/mL、制霉菌素• 1 000 lU/mL)的等渗磷酸盐缓冲液(PBS.pH

NY/T 3791—2020

7.。〜7. 4),充分研磨,然后反复冻融3次,8 000 r/min离心10 min,取上清液经0. 22滤膜过滤除菌后

接种SPF鸡胚或LMH细胞系。

2.2拭子样品处理

将拭子样品在振荡器上充分混合后,将拭子中的液体挤出,室温(2O°C〜25°C)静置作用30 min,

3 000 r/min离心5 min,取上清液转入无菌的1. 5 mL离心管中,编号备用。

5.3样品保存

处理后的样品应尽快进行病毒分离与鉴定。如不能立即进行鉴定,应置于一80°C进行保存,在4°C保 存不超过1 do

6病毒分离与鉴定

6.1主要仪器

6.1.1倒置生物显微镜。

6.1.2 C()2培养箱。

6.1.3微量移液器。

6.1.4 4°C离心机。

6.1.5细胞培养瓶和细胞培养板。

6.2主要试剂

6.2. 1 PBS缓冲液:配方见附录A中的A. 1。

6.2.2细胞培养液:含10%血清的DMEM培养基。

6.2.3细胞维持液:含1%血清的DMEM培养基。

6.3试验动物与细胞

3. 1 SPF 鸡胚。

6. 3.2 LMH 细胞。

6.4试验程序

6.4.1鸡胚接种分离病審

6. 4. 1. 1用1 mL注射器吸取处理后的上清液按每枚0. 1 mL,经卵黄囊接种5枚6日龄SPF鸡胚。

6. 4. 1. 2接种后,37°C〜38°C继续孵育120 h。期间每12 h观察鸡胚死亡情况,弃去24 h内死亡鸡胚。

6.4. 1.3收集接种后24 h〜120 h死亡鸡胚和120 h仍存活鸡胚,置于2°C〜8°C过夜,分别无菌收集尿 囊液进行病毒鉴定。

6.4.2细胞接种分离病毒

6.4.2.1制备单层细胞:按照常规方法将LMH细胞分装在细胞培养瓶中,37°C培养至单层备用。

6.4.2.2样品接种:将处理好的样品上清液接种单层LMH细胞,孵育1 h后吸弃上清液,用PBS缓冲液 轻轻洗涤2次,吸弃后加入细胞维持液,37笆培养72 h。

6. 4. 2. 3观察和记录:7()%以上单层细胞出现细胞变大变圆、遮光度增加等典型细胞病变时,将细胞培养 物冻融后,离心去掉细胞碎片,取上清液进行病毒鉴定。

6. 4. 2. 4肓传:如接种细胞第1代72 h后未出现CPE,收获细胞/病毒液按6. 4. 2. 2所述方法再接种 LMH单层细胞进行肓传,如此肓传3代。

6.5病毒鉴定

对鸡胚尿囊液和出现CPE的细胞培养液,可选用第7章、第8章、第9章或第10章的规定进行鉴定。

7琼脂扩散试验

本方法可用于待检抗原的鉴定或血清抗体的鉴定。其中,待检抗原可为发病禽肝脏组织研磨处理后

(以上是摘录部分标准内容,更多信息还请参考原文PDF)

网盘链接

百度网盘:https://pan.baidu.com/s/1-YIUzKwZumZCEMnrkQiuEA
提取码:it7g

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