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SC/T 7204.5—2020 对虾桃拉综合征诊断规程第5部分：逆转录环介导核酸等温扩增检测法[高清PDF]

钱凡旋 4/22/2022 浏览 123 SC/T 7204.5—2020 国内

标准简介

[SC/T 7204.5—2020]《对虾桃拉综合征诊断规程第5部分：逆转录环介导核酸等温扩增检测法》是于2020-08-26发布的水产行业标准标准，适用于中华人民共和国。

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标准文档说明

标准文档类型为对虾桃拉综合征诊断规程第5部分：逆转录环介导核酸等温扩增检测法高清PDF版本（文字版），标准文档内可进行搜索，可以复制原文，可粘贴。

标准部分原文

(*注：以下内容并未完全按照原文进行排版，且信息并不完全，也未经过严格校对，所以仅供参考！建议【不要直接作为从业依据】！具体信息还请阅读标准原文PDF。)

对虾桃拉综合征诊断规程第5部分：逆转录环介导核酸等温扩增检测法
1范围
本部分给出r对虾桃拉综合征病荏逆转荥环介导核酸等温扩增检测法所需试剂和材料、器材和设备、
操作步骤和结果判定的要求。一
本部分适用于对虾桃拉综合征的询帝检测.
5甜菜碱(Betaine)：浓度5 mol/L,按A. 2规定执行,-20°C保存，避免反复冻融。
6 硫酸镁(MgSQ)：浓度 100 mmol/L,-20°C保存。
4.7 M MLV逆转录前：帆浓度2()() U/M〃一20°C保存，避免反知冻融。
8 DNA聚合齣:酶浓度8 U/ML,-20°C保存.避免反复冻融。
9核酸染料：20X Eva Green.商品化试剂,4°C保存，或其他等效核酸染料。
4. 10阳性对照为已知感染TSV且RT PCR结果显示明显阳性的对虾组织,_80°C保存。
12空白对照为RNase-free水。
5器材和设备
1微量移液器。
5.2离心机。
5.3手掌型离心机。
4普通冰箱。
5.5 -8O°C超低温冰箱。
5.6涡旋振荡器。
7无RNA酶的1. 5 mL离心管。
8 无 RNA 酶的 0. 2 mL PCR 管。
5.9无RNA酶的微量移液枪头。
10实时荧光定it PCR仪。
6操作步骤
1样品的准备和RNA的提取
1. 1样品准备方法和样品RNA提取按SC/T 7204. 3 20()7中7. 2和7. 3的要求，或采用等同效果的商品化试剂盒。
1.2核酸提取完成后测定RNA浓度和质量，将RNA稀释为10 ng/ML~10() ng/^L,取10贝，分装于 0. 2 mL PCR管中，在65°C条件下保温15 min,然后迅速置于冰上，完成核酸的变性。
2 R1-LAMP 检测
6.2. 1反应体系配制
按表1的要求，在冰盒上的低温状态下配制RT LAMP检测反应体系，混匀后，分装为24卩1丿管；同时设置空白对照、阴性对照和阳性对照。空白对照中加入1 RNase-free水作为模板，阴性对照、待检样品、阳性対照中分别次序加入】〃L、总量为10 ng〜10() ng的变性RNA作为模板。
表1 R1-LAMP反应预混物所需试剂
试剂
加样量,贝.
试剂终浓度
IOXIsothermal Amplification Buffer
2.5
IX
MgSOj (100 mmol/L)
1.0
4. 0 mmol/L
Betaine (5 niol/L)
6.0
1. 2 mol/L
dNTP (各 20 mmol/L)
1.5
1. 2 mmol/L
TSV-F1P (20 Mmol/L)
2.0
1. 6 /zmol/L
TSV-BIP (20 Mmol/L)
2.0
1. 6 ”m()I/L
TSV E3 (1() Mmol/L)
0.5
0. 2 ；xinol/L
TSV-B3 (10 Mmol/L)
0. 5
0. 2 “mol/L
M MI.V 逆转录酶(200 U/ML)
0.2
1.6 U/ML
Hsl DNA 聚合前(8 U/ML)
1.0
0. 32 U/ML
Eva Green (25 >moI/L)
0.8
0. 8 /xniol/L
RNase-free 水
6.0
反应体系配制也町采川同等效果的商业化RT LAMP忒剂盒代替。注:扩増靶序列参见附录B,推荐实验室分区和污染控制措施见附录Co
6.2.2反应条件

（以上是摘录部分标准内容，更多信息还请参考原文PDF）

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