NY/T 3693-2020 百合枯萎病抗性鉴定技术规程[高清PDF]

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(*注：以下内容并未完全按照原文进行排版，且信息并不完全，也未经过严格校对，所以仅供参考！建议【不要直接作为从业依据】！具体信息还请阅读标准原文PDF。)

1范围

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取病株病健组织交界部位,用解剖刀切成1 cm长的茎段，或取百合带病种球.干病健组织交界部位切取 小块鳞茎(0.5 cmXO. 5 cm),自来水清洗干净后用75%酒精浸2 s~3 s,再用2%次氯酸钠溶液浸泡3 min, 取出用灭菌水清洗3次。

1.3病原分离

在超净工作台内,将消毒好的茎段或小块鳞茎接种至PSA平板培养基，每培养皿接3块〜4块，写明 编号后用保鲜膜封好，放至(25士2)°C培养箱中培养5 d〜7 d。

1.4分离物鉴定及纯化

分离物鉴定参见附录A。确认为尖抱镰刀菌百合专化型^Fusarium oxysporum f. sp. Lilii)后，采用 单抱分离法进行分离物纯化，经科赫(Koch)法则验证后，将经过纯化的百合枯萎病致病菌接种于PSA斜 面培养基上，在（25士2）°C的恒温培养箱中培养7 d,置于4°C~8°C冰箱内保存备用。

5.2接种体繁殖和保存

2.1接种体的繁殖

将保存的百合枯萎病菌置于25°CPSA平板培养基上培养3 d活化后，接种于盛有PS培养液的锥形 瓶中，置于（25土2）°C摇床上，以120 r/min振荡培养3 d〜5 d0将培养液经两层医用纱布过滤即得以小 型弛子为主的弛子悬浮液,然后用蒸储水稀释滤液至所需接种浓度。

2.2接种体保存

常用保存方法为将百合枯萎病菌接种于PSA斜面培养基上，在（25 土 2） °C的恒温培养箱中培养7 d, 置于4°C〜8°C冰箱内保存。

6室内抗性鉴定

1鉴定室

人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件,使人工接种后具备良好的发病环境。

6.2鉴定设计

鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一次重复10株苗或是20片鳞片。

6.3鉴定对照材料

设高抗百合品种为抗病对照品种，高感百合品种为感病对照品种，同时设置空白对照。

6.4鉴定材料准备

6- 4.1采用百合组培生根苗。将百合组培生根苗移栽至穴盘中炼苗，炼苗基质为泥炭：珍珠岩=2 : 1 （体积比），经高温蒸汽灭菌（134°C,30min）。在温室或塑料大棚内炼苗，设施内温度白天为2O°C〜26°C, 夜晚为15°C~20°Co所有幼苗应生长健壮、一致，每株幼苗有8片以上展开叶。

6.4.2采用百合种球鳞片。将不同系列正常可开花的百合种球由基部小心剥离，去除外层鳞片,将中层 鳞片置于1% NaClO溶液中消毒10 min,在自来水下冲洗干净后置于滤纸上晾干待用。

6.5接种

6.5.1接种时期

缓苗后正常生长的幼苗和消毒晾干后的鳞片。

6.5.2接种浓度

接种体悬浮液的分生抱子数为（1〜1.5）X106个/mL。

6.5.3接种方法

5. 3. 1百合组培生根苗采用灌根接种法,用灭菌注射器吸取接种体悬浮液注射至百合植株茎基部,每 株注射2 mL0接种后用塑料薄膜覆盖植株，保湿48 h ,

6.5. 3.2百合（种球）鳞片釆用土壤接种法。用接种针挑取小決保存的接种体菌丝接种于马铃薯蔗糖琼 脂培养基（PSA）上，待菌丝长满平板后用打孔器切取5块直径为8 mm的菌块，接种至灭菌的100 mL燕 麦一基质泥炭混合物中，燕麦：泥炭=1 : 5（W/W）。（25±2）°C培养M d后，将菌土混合物充分压碎，按 1%（V/V）的比例加入灭菌基质泥炭中，混匀，（25±2）°C培养14 d,使館落稳定后，将百合鳞片包埋于含有 菌土的基质中;或将鳞片拝插到基质中,注意基部朝下，插入深度为鳞片的1/2,间距3 cmo

5. 3. 3空白对照是采用无菌水代替抱子悬浮液进行接种。

6.5.4接种后管理

6.5.4. 1接种后将植株置于鉴定室内，每天光照14 h,强度为70 MEm-2s,保持植株正常生长的土壤湿 度，即60%〜70%,接种期间鉴定室温度控制在（25±2）°C范围内。

5. 4. 2将接种百合鳞片的花盆置于鉴定室内，60%〜70%相对湿度,18°C条件下培养。

7病情调查

1调查时间

百合组培生根苗接种后10 d〜15 d调查病情,百合鳞片则是60 d后调查病情,根据此期间感病对照 品种病级扩展到感病病级的时间,可将调查病情的时间作适当调整。

7.2病情级别划分

幼苗和鳞片病情级别及相应的症状描述见表1和表20

表1百合组培苗枯萎病病情级别的划分

病情级别

症状描述

0

无症状

1

叶片叶缘卷曲黄化、萎薦，受害面积占植株面积25%

2

叶片卷曲黄化、萎驀，受害面积占植株面积26%〜50%

3

叶片卷曲黄化、萎驀，受害面积占植株面积51%〜75%

4

叶片全部萎蔦或死亡，受害面积占植株面积76%〜100%

表2百合鱗片枯萎病病情级别的划分

病情级别

症状描述

0

无症状

1

轻微腐烂,腐烂面积占单片鳞片25%

2

中度腐烂,腐烂面积占单片鳞片26%〜50%

3

严重腐烂,腐烂面积占单片鳞片56%〜75%

4

极严重腐烂,腐烂面积占单片鳞片76%〜100%

7.3调查方法

按7. 2病情级别划分调查每份鉴定材料发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行，记载单株/单片 鳞片病情级别。

7.4病情指数统计方法

计算每份鉴定材料的病情指数（DI）,计算结果取3次重复平均值。

病情指数（DD按式⑴计算。

习（S X 7?） DI=~NVS~X 100⑴

式中：

DI ——病情指数；

s——各病情级别的代表数值；

n ——各病情级别的植株数/鳞片数；

N——调查总植株数/鳞片数；

S——最高病情级别的代表数值。

8抗病性评价

8.1鉴定有效性判别

8. 1. 1当感病对照材料达到其相应感病程度（DI25O），抗病对照材料与实际抗性程度相符，该批次抗枯 萎病鉴定视为有效。

8. 1.2以对照品种发病程度明显异常时判定该批次鉴定无效。

8.2抗病性评价标准

依据鉴定材料的病情指数（D1）平均值确定其抗性水平,划分标准见表3O

（以上是摘录部分标准内容，更多信息还请参考原文PDF）

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