SC/T 7224—2017 鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法[高清PDF]

标准简介

[SC/T 7224—2017]《鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法》由方中华人民共和国农业部于2017-06-12发布,适用于中华人民共和国。

标准截图

鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法
鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法(截图)

 

标准文档说明

标准文档类型为鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法高清PDF版本(文字版),标准文档内可进行搜索,可以复制原文,可粘贴。

标准部分原文

(*注:以下内容并未完全按照原文进行排版,且信息并不完全,也未经过严格校对,所以仅供参考!建议【不要直接作为从业依据】!具体信息还请阅读标准原文PDF。)

1范围

本标准给出了鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测的技术原理,规定了试 剂和材料、器材和设备、操作步骤及结果判断。

本标准适用于鲤春病毒血症病毒的初筛检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 15805.5鱼类检疫方法 第5部分:鲤春病毒血症病毒(SVCV)

GB/T 18088出入境动物检疫釆样

SC/T 7103水生动物产地检疫采样技术规范

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

AMV 酶:AMV 逆转录酶(avian myelobastosis virus reverse transcriptase)

Bst 酶:Bst DNA 聚合酶(大片段DNA Polymerase(large fragment)]

DEPC:焦碳酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate)

dNTP:脱氧核昔三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)

EDTA:乙二胺四乙酸(ethlenediamine tetraacetic acid)

PBS:磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffer saline)

RT-LAMP:逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification)

SVCV:鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus)

4技术原理

本标准根据SVCV(参见附录A中A. 1)基质蛋白基因,设计了 4条引物(参见附录B)特异性识别 基因组中的6个区域。在AMV酶和链置换Bst酶的作用下,63°C恒温扩增60 min,即可实现SVCV核 酸扩增。而后,在扩增反应后加入显色液,即可通过观察颜色变化判定结果。

5试剂和材料

5. 1水:符合GB/T 6682中一级水的规格。

5. 2 DEPC水:配制方法见附录C中C. 1或购买商品化试剂。

5. 3磷酸盐缓冲液(PBS):配制方法见C. 2或购买商品化试剂。

5.4 Trizol试剂:商品化试剂,4°C保存。

5.5三氯甲烷:分析纯,避光常温保存。

SVCV - FIP: 5'- CGCTTGTTCCTAGAACCTTTGTAATTTTTCCCTTGAAGACGATGTCAG - 3',40《mol/L备用;

SVCV - BIP: 5'- TACAGATTGATCATGTTCCGTTGTGTTTTTGGAATACAAGGCCGACC - 3* ,40 jzmol/ L 备用;

SVCV -F3:5Z- GGATATACAATTGGACACC - 3’, 10 jzmol/ L 备用;

SVCV -B3:5Z- ACAACTTCCTTGCACCTT - 3’,10 Mmol/ L 备用 o

5. 8 10XThermoPol 缓冲液:商品化产品, Tris - HCl、0. 1 mol/L 氯化钾、0. Imol/L

硫酸铉、20 mmol/ L硫酸镁、1% T山on X-100。

5.9

5. 10

5.11

5.12

5. 13

5. 14

5. 15

5. 16

5. 17

5. 18

5.19

或含

醇和

4)

复冻融

E

10 mmo

DNA

CV的

使用

前预

试剂。

的核酸。

胞培养

dNTPs:含 dATP、dTTP、dCTP、d 甜菜碱:浓度5 m。

硫酸镁(MgSO,):浓

AMV 酶:酶

Bst 酶:酶

矿物油:要求无R

75%乙醇:分 显色液i»R Green 1(配制

开启的无

C.

涎免反复冻融。

阳性对照:感 阴性对照

空白对照

6器材和设

6. 1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

6.9

移液器: 冷冻高i 无菌研钵或研 涡旋振荡器 恒温金属浴耳 计时器。

冰箱。

无菌剪刀、镶子、离心管: 消毒设备。

7操作步骤

7. 1样品采集

7. 1. 1采样对象

鲤、锦鲤和金鱼等易感鱼类(参见A. 2)。

7. 1.2釆样水温与数量

应在水温13°C〜21°C间进行,采样数量应符合SC/T 7103的要求。

7. 1.3样品采集

按GB/T 18088的规定执行。对有临床症状(参见A. 3)的鱼,体长<4 cm的鱼苗取整条鱼,体长

(以上是摘录部分标准内容,更多信息还请参考原文PDF)

网盘链接

百度网盘:https://pan.baidu.com/s/1ToNMsDewcKeq9y_mvWq4UA
提取码:9eww

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