SC/T 7224—2017 鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法[高清PDF]
标准简介
[SC/T 7224—2017]《鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法》由方中华人民共和国农业部于2017-06-12发布,适用于中华人民共和国。标准截图

标准文档说明
标准文档类型为鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法高清PDF版本(文字版),标准文档内可进行搜索,可以复制原文,可粘贴。标准部分原文
(*注:以下内容并未完全按照原文进行排版,且信息并不完全,也未经过严格校对,所以仅供参考!建议【不要直接作为从业依据】!具体信息还请阅读标准原文PDF。)
1范围
本标准给出了鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测的技术原理,规定了试 剂和材料、器材和设备、操作步骤及结果判断。
本标准适用于鲤春病毒血症病毒的初筛检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 15805.5鱼类检疫方法 第5部分:鲤春病毒血症病毒(SVCV)
GB/T 18088出入境动物检疫釆样
SC/T 7103水生动物产地检疫采样技术规范
3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AMV 酶:AMV 逆转录酶(avian myelobastosis virus reverse transcriptase)
Bst 酶:Bst DNA 聚合酶(大片段DNA Polymerase(large fragment)]
DEPC:焦碳酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate)
dNTP:脱氧核昔三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)
EDTA:乙二胺四乙酸(ethlenediamine tetraacetic acid)
PBS:磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffer saline)
RT-LAMP:逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification)
SVCV:鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus)
4技术原理
本标准根据SVCV(参见附录A中A. 1)基质蛋白基因,设计了 4条引物(参见附录B)特异性识别 基因组中的6个区域。在AMV酶和链置换Bst酶的作用下,63°C恒温扩增60 min,即可实现SVCV核 酸扩增。而后,在扩增反应后加入显色液,即可通过观察颜色变化判定结果。
5试剂和材料
5. 1水:符合GB/T 6682中一级水的规格。
5. 2 DEPC水:配制方法见附录C中C. 1或购买商品化试剂。
5. 3磷酸盐缓冲液(PBS):配制方法见C. 2或购买商品化试剂。
5.4 Trizol试剂:商品化试剂,4°C保存。
5.5三氯甲烷:分析纯,避光常温保存。
SVCV - FIP: 5'- CGCTTGTTCCTAGAACCTTTGTAATTTTTCCCTTGAAGACGATGTCAG - 3',40《mol/L备用;
SVCV - BIP: 5'- TACAGATTGATCATGTTCCGTTGTGTTTTTGGAATACAAGGCCGACC - 3* ,40 jzmol/ L 备用;
SVCV -F3:5Z- GGATATACAATTGGACACC - 3’, 10 jzmol/ L 备用;
SVCV -B3:5Z- ACAACTTCCTTGCACCTT - 3’,10 Mmol/ L 备用 o
5. 8 10XThermoPol 缓冲液:商品化产品, Tris - HCl、0. 1 mol/L 氯化钾、0. Imol/L
硫酸铉、20 mmol/ L硫酸镁、1% T山on X-100。
5.9
5. 10
5.11
5.12
5. 13
5. 14
5. 15
5. 16
5. 17
5. 18
5.19
水
或含
可
醇和
4)
复冻融
商
E
10 mmo
DNA
CV的
使用
前预
试剂。
的核酸。
胞培养
dNTPs:含 dATP、dTTP、dCTP、d 甜菜碱:浓度5 m。
硫酸镁(MgSO,):浓
AMV 酶:酶
Bst 酶:酶
矿物油:要求无R
75%乙醇:分 显色液i»R Green 1(配制
开启的无
C.
涎免反复冻融。
阳性对照:感 阴性对照
空白对照
6器材和设
6. 1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
移液器: 冷冻高i 无菌研钵或研 涡旋振荡器 恒温金属浴耳 计时器。
冰箱。
无菌剪刀、镶子、离心管: 消毒设备。
7操作步骤
7. 1样品采集
7. 1. 1采样对象
鲤、锦鲤和金鱼等易感鱼类(参见A. 2)。
7. 1.2釆样水温与数量
应在水温13°C〜21°C间进行,采样数量应符合SC/T 7103的要求。
7. 1.3样品采集
按GB/T 18088的规定执行。对有临床症状(参见A. 3)的鱼,体长<4 cm的鱼苗取整条鱼,体长
(以上是摘录部分标准内容,更多信息还请参考原文PDF)
网盘链接
百度网盘:https://pan.baidu.com/s/1ToNMsDewcKeq9y_mvWq4UA
提取码:9eww
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